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杂交瘤技术的基本原理是通过融合两个细胞的主要特征。

这两个细胞是抗原免疫的小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞。用特异性抗原免疫的小鼠脾细胞（B淋巴细胞）的主要特征是其抗体分泌功能，但不能在体外连续培养。小鼠骨髓瘤细胞可以在培养条件下，即所谓的永生中分裂和增殖。

在选择培养基的作用下，只有融合B细胞和骨髓瘤细胞的杂化细胞才能继续培养并形成具有抗体分泌功能并维持细胞不朽的细胞克隆。

该原则在以下三个主要步骤中进行了解释。

（i）细胞的选择和融合

建立杂交瘤技术的目的是制备针对抗原特异性的单克隆抗体，因此融合细胞必须选择抗原免疫的B细胞，通常来自免疫动物的脾细胞。

脾脏是B细胞收集的重要场所。无论刺激哪种免疫方法，脾脏中都会有明显的抗体反应。融合细胞的另一方是在细胞融合后保持细胞的连续增殖，并且只有肿瘤细胞具有这种特征。

选择同一系统的细胞可以增加融合的成功率。多发性骨髓瘤是B细胞线恶性肿瘤，因此它是理想的脾细胞融合伴侣。

细胞融合剂的使用会对细胞膜造成一定程度的损害，从而使细胞容易粘附和融合在一起。

最佳融合效应应是最低的细胞损伤程度和最高的融合频率。聚乙烯乙二醇（PEG1 000-2 000）是最常用的细胞融合剂，一般施用浓度为40％（w/v）。

（ii）选择培养基的选择

细胞融合是一个随机物理过程。在小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞的混合细胞悬浮液中，融合后将以各种形式出现。

例如融合的脾细胞和肿瘤细胞，融合的脾细胞和脾细胞，融合的肿瘤细胞和肿瘤细胞，未掺杂的脾细胞，未散发的肿瘤细胞和多聚体形式的细胞等等。

正常的脾细胞仅在培养基中存活5至7天，而无需进行特殊筛查。多聚体的细胞形式容易死亡，而不筛查的肿瘤细胞需要通过特殊筛查去除。

通常有两种细胞DNA合成的方法。主要途径是从糖和氨基酸合成核苷酸，然后合成DNA。作为重要的辅酶，叶酸参与了这种合成过程。

另一个辅助途径是在存在低黄嘌呤和胸腺胺核苷的情况下，通过低黄嘌呤磷酸核糖转化酶（）和胸腺氨酸激酶（TK）催化作用来合成DNA。

细胞融合的选择培养基中有三个关键组成部分：低黄嘌呤（，h），甲氨蝶呤（，a）和胸腺嘧啶（，t），因此这三个结尾称为HAT培养。根据。

甲氨蝶呤是叶酸的拮抗剂，可以使用正常途径阻止肿瘤细胞合成DNA。用于融合的肿瘤细胞是通过有毒培养基选择的细胞系，因此不能在这种培养基中生长。只有融合细胞具有父母双方的遗传特性，并且可以在HAT培养基中生存和繁殖很长一段时间。

（iii）有限的稀释和抗原特异性选择

在动物免疫中，应使用高纯抗原。

抗原通常具有多种决定因素。动物在被抗原刺激后产生的体液免疫反应本质上是来自众多B细胞群体的抗体分泌，而靶向靶抗原表位的B细胞仅占很小的比例。

由于细胞融合是一个随机过程，因此在已经融合的细胞中有相当大的无关细胞融合，需要通过筛选去除。

筛选过程通常分为两个步骤：一个是融合细胞的抗体筛选，另一个是基于此的特定抗体筛选。

将融合的细胞彻底稀释，以使分配给每个孔孔的细胞数量在0到几个细胞之间（30％的井为0，以确保每个孔都是单个细胞）。培养后，服用上清液选择具有高抗体分泌的细胞。这个过程通常称为克隆。这些阳性细胞再次克隆，并发现针对靶抗原的抗体阳性细胞系与特定的抗原涂在一起。增殖后，它们被冷冻，体外培养或在动物中接种。

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